RNAすいすい-S＋LiCl沈殿法

RNAすいすいシリーズは、『LiCl沈殿法』と組み合わせることも可能です。

多糖類の残存が多い場合などに有効な方法です。

通常のプロトコルにある「イソプロパノール沈殿」の代わりに行うだけなので、

ステップ数が増えることもありません。

お客様からプロトコル送付のご依頼をいただきましたので、これを機にご紹介します。

（このときの材料は、オオムギの完熟種子です。

『RNAに多糖類が多く残存してしまう』、というお悩み相談を受け、

２０１１年に検討しました。）

【プロトコール】

まずは常法（「RNAすいすい-S」の標準プロトコル）です。

１．チューブに400μｌRNAすいすい-S、4μl 2-MEを入れ氷上に置く。

２．オオムギ完熟種子2粒をアルミホイルでくるみ、ペンチでつぶして１に加える。

さらにペッスルでつぶして混合する。

３．200μl酸性フェノール、150μlクロロホルムを加えて混合、氷上15分。

４．15000rpm、10分遠心

５．上清300μlを回収

６．等量の冷イソプロパノールを加えて混合、－20℃、30分

７．15000rpm、10分遠心

８．沈殿を400μl 70％エタノールで洗浄　

９．50μlの水に溶解

次に、『LiCl沈殿法』を組み合わせる場合です。

１．～５．まで同じ

６．100μlの10M　LiClを加え、－20℃、30分

７．15000rpm、10分遠心

８．沈殿を400μl 70％エタノールで洗浄　

９．50μlの水に溶解

・・・あっけないほど簡単です。

電気泳動するとこんな感じになりました。

左が通常のプロトコル、右がLiCl法を組み合わせたものです。

低分子量領域の太いバンドが消えて、

全体として泳動像がきれいになっています。

沈殿の状態も、白っぽくて大きくて溶解しにくいものから、

小さめで透明感があって溶けやすいものに変わりました。

水溶性の多糖類を、うまく除去できたようです。

ご参考になれば幸いです！

澱粉の多い植物材料からのRNA抽出がすいすいできる、

「RNAすいすい-S」の製品ご案内ページはこちらです。

http://www.rizo.co.jp/RNA-S.html

＜蛇足＞

泳動写真がなぜオレンジ色なのか？

それは、手製のゲル撮影装置で撮影したからです。

（オレンジ色のアクリル板を通してデジカメで撮影）

必要であれば、画像処理で白黒にすることも、もちろんできます。　　

貧乏ラボのゲル撮影装置の作り方は、こちらの記事にて紹介しています。

http://rizo-inc.cocolog-nifty.com/blog/cat36785625/index.html