ドライイースト（酵母）からのDNA抽出

先日、お客様から、『ドライイースト』からのDNA抽出のご依頼を受けました。

でも、普通のプロトコルでやるのはちょっと悔しい・・・。

リーゾの「すいすいシリーズ」をベースにして、簡単に取れないだろうか？

というわけで、試してみたところ、

加工食品用「DNAすいすい-PF」と、

細胞壁分解酵素「Zymolyase（ザイモリアーゼ）」の組み合わせで、

酵母のゲノムDNAが簡単に取れることがわかりました。

以下、ご報告です！

まず、ドライイースト数粒（5mgくらい）をチューブに取り、

720μlのDNAすいすい-PFで懸濁します。

次に、Zymolyaseを加えます。

購入したのは粉末だったので、50mgを滅菌水1mlに溶解し（冷凍保存）、これを80μl加えて混ぜました。

この状態で、３７℃のインキュベータに入れます。

時間は長いほどいいわけですが、とりあえず３０分で。

３０分後の状態です。

・・・振っちゃったのであまり変わってないように見えますが、

振る前は（溶菌状態特有の）ねばーっとした浮遊物が見えてました。

あとは、フェノクロで除タンパク処理をして、イソプロパノール沈殿します。

このへんは、通常の「すいすいシリーズ」と同じです。

沈殿が見えてます。

RNase処理をしていないので、かなり大きめです。

100μlの水に溶解して、5μlを電気泳動してみました。

取れてました～。

下の方に見えるのは、分解しかけのRNAです。

波形も確認。

このやり方で、1回に取れた量（RNAを含む計算値）は、約40μgでした。

酵素処理の時間を長くすると、もっとたくさん取れるようです。

（ためしに3日間置いたときには、350μgほど取れました）

コストを計算してみました。

DNAすいすい-PF 　1本20,000円で125回

　⇒160円／回

Zymolyase（ナカライ）　1グラム10,000円で250回

　⇒40円／回

合計　200円／回。

あとは、フェノクロやイソプロ、エタノールなどが要ります。

安いかどうかよくわかりませんが、

とりあえず、「簡単で早い」＝すいすいには当てはまりそうです。

酵母ゲノム・プラスミド抽出には市販のキットがすでにたくさんありますが、

ご参考になればと思い、ご紹介しました！

リーゾのHPはこちらです。

http://rizo.co.jp/