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2009年10月28日 (水)

実演「RNAすいすい-S」

デンプンや糖類の多い組織からきれいなRNAが抽出できるということで

研究へのご採用が増えている「RNAすいすい-S」。

「使い勝手はどうなのか?」「実際どんなプロトコルで取れるのか?」

気になる方も多いと思います。

そこで今日は・・・

RNAすいすい-Sでイネ種子胚乳からRNAを抽出する

の実演をご覧に入れます。

  

①まずバッファー400μlを、1.5ml(2mlでも可)のエッペンチューブに入れます。

ちょっと臭いですが、RNAの分解を防ぐため、メルカプトエタノールを

3μlほど足しておくのがお勧めです(手早くやれば、なしでも大丈夫です)。

氷の上に置いて、冷やしておいてください。

  

Photo_6 ②サンプルを用意します。

イネ種子胚乳とは、要するにお米(精米)です。

これをひと粒(約20mg)アルミ箔の上に載せ、

(中央あたりにあります)

くるくると包み、ペンチなどでつぶします。

 

 

Photo_3 Photo_4

Photo_7 (液体窒素で凍らせながら、乳鉢で粉砕するのが本式ですが、今回は略式で。

品質はやや落ちますが、これでも十分取れます。

ビーズ式粉砕機をお持ちなら、バッファーと米とビーズを入れて粉砕することもできます)

  

 

 

 

 

  

  

Photo_8 ③つぶしたお米を用意しておいたバッファーに入れて懸濁します。

本品の場合、澱粉が溶解せず、バッファー中に分散した状態に

なります。 

核酸はちゃんと溶解していますのでご安心を。

 

 

 

 

  

 

Photo_9 ④添付の酸性フェノールすいすいを使って酸性フェノールを作ると、

赤紫色の酸性フェノールができます。

酸性フェノール200μlとクロロホルム150μlを加えたところです。

氷上に15分ほど置き、遠心します。

  

 

 

 

 

 

 

Photo_10 遠心後はこうなります。

赤紫の下層はフェノクロです。

粘性のない、さらさらした上層200μlを、ピペットマンで別のチューブに

移します。ここで欲張らないのも成功のコツです。

   

 

  

  

  

  

2_2 ⑤等量のイソプロパノールを加えたところです。

通常の抽出法では、ここでデンプンの「ダンゴ」が出現して

がっかりしますが、RNAすいすい-Sなら大丈夫です。

でもまだRNAは見えません・・・。

このままフリーザーで20分ほど冷やしたのち、遠心します。

  

 

  

  

  

Rna   ⑥液体を捨て、沈殿を残します。

チップの先に小さな沈殿があるのが・・・見えるでしょうか?

これがRNAです。

70%エタノールでリンスして、DEPC処理した水に溶解して出来上がりです。

 

 

 

  

  

  

Untitled1アガロースゲル電気泳動で確認すると、こんな感じです。

DNaseは含まれていないので、ゲノムDNAが少し残存します。

DNAを完全に除くには、やはりDNase処理をしてください。

(低価格実現のため、DNaseはつけていません。ご了承ください)

  

どうです?簡単でしょう?

所要時間は抽出だけだと1時間程度でした。

  

DNAすいすい-Sもだいたい同様の操作で使えます。

(お米からのDNA抽出の場合、フェノクロが不要なのでもっと簡単です)

 

こちらの「RNAすいすい-S」のご案内はこちらです。

http://www.rizo.co.jp/RNA-S.html

   

なお、シソ科植物など、ポリフェノールがRNA抽出を阻害するような材料の場合には、

RNAすいすい-P(ポリフェノールが多い植物組織向け)

http://www.rizo.co.jp/RNA-P.html

がお勧めです。

また、DNAの抽出には、

DNAすいすい-S(澱粉が多い植物組織向け)

http://www.rizo.co.jp/DNA-S.html

DNAすいすい-P(ポリフェノールが多い植物組織向け)

http://www.rizo.co.jp/DNA-P.html

DNAすいすい-R(ゼリー状物質が多いバラ科などの植物組織向け)

http://www.rizo.co.jp/DNA-R.html

をよろしくお願いします。

 

ご注文は、茨城・つくば地区は、東新株式会社つくば営業所 029-855-7960へ

それ以外の地域の方は直接リーゾへ、ご連絡ください。

(各地方の代理店様とお取引をさせていただいております。)

  

  

 

RNAすいすい-Sのご案内はこちらです↓

http://members3.jcom.home.ne.jp/rizo.inc/RNA-suisui-S.html

 

  

  

  

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